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體外細(xì)胞的原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇

一、實驗原理細(xì)胞培養(yǎng)可分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。直接從體內(nèi)獲取的組織細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)為原代培養(yǎng)；當(dāng)原代培養(yǎng)的細(xì)胞增殖達(dá)到一定密度后，則需要做再培養(yǎng)，即將培養(yǎng)的細(xì)胞分散后，從一個容器以1：2或其他比率轉(zhuǎn)移到另一個或幾個容器中擴大培養(yǎng)，為傳代培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)的累積次數(shù)就是細(xì)胞的代數(shù)。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以最大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或DMSO作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶...

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細(xì)胞株的培養(yǎng)、凍存與復(fù)蘇

1、細(xì)胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：用于檢測細(xì)胞因子的細(xì)胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)細(xì)胞因子依賴細(xì)胞株還有加入適量細(xì)胞因子。在37℃5％CO2的飽和水套式二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，3～4天傳代一次。懸浮生長細(xì)胞的傳代：直接直接吸去或離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞，1：3或1：5稀釋細(xì)胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。帖壁生長細(xì)胞的傳代：吸去培養(yǎng)液，用PBS洗滌細(xì)胞一次，加入消化液，在37℃中消化約3～10分鐘，待細(xì)胞開始脫落時，倒去消化液，加入新鮮培養(yǎng)液，懸浮和吹...

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20％的氧氣是否始終適合細(xì)胞培養(yǎng)水平？

研究人員在體外細(xì)胞培養(yǎng)的正確實驗設(shè)計上花費了大量時間和金錢，為什么培養(yǎng)的細(xì)胞具有與人體相同的生理功能如此困難？您可以在無菌環(huán)境中工作，使用實驗室細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備并使用細(xì)胞培養(yǎng)試劑，但是您的細(xì)胞仍然不滿意嗎？答案很簡單。氧氣水平。我們都知道，人體中的每個細(xì)胞都需要氧氣才能生存，并通過氧化磷酸化產(chǎn)生能量。氧氣對于細(xì)胞的生長和分化至關(guān)重要，但是細(xì)胞所接觸的氧氣水平對細(xì)胞功能至關(guān)重要。大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)實驗室都設(shè)置為在20％氧氣和5％二氧化碳培養(yǎng)箱環(huán)境中培養(yǎng)細(xì)胞。這種“標(biāo)準(zhǔn)的護(hù)理方案”令人驚...

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二氧化碳培養(yǎng)箱出現(xiàn)加熱管報警根緣

二氧化碳培養(yǎng)箱是通過在培養(yǎng)箱箱體內(nèi)模擬形成一個類似細(xì)胞/組織在生物體內(nèi)的生長環(huán)境，培養(yǎng)箱要求穩(wěn)定的溫度（37°C）、穩(wěn)定的CO2水平（5%）、恒定的酸堿度（pH值：7.2-7.4）、較高的相對飽和濕度（95%），來對細(xì)胞/組織進(jìn)行體外培養(yǎng)的一種裝置，是細(xì)胞、組織、細(xì)菌培養(yǎng)的一種先進(jìn)儀器，是開展免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、遺傳學(xué)及生物工程所必須的關(guān)鍵設(shè)備。電氣故障:溫度控制器輸出端無輸出或一直輸出無法做通斷ONOFFPID控制。偏移誤差:先自我整定PID,穩(wěn)定后不準(zhǔn)即調(diào)整偏差值，使與實際正...

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高溫馬弗爐停用后再次使用時的注意事項

1、當(dāng)高溫馬弗爐次使用或長期停用后再次使用時，必須進(jìn)行烘爐。烘爐的時間應(yīng)為室溫200℃四小時。200℃至600℃四小時。使用時，爐溫不得超過額定溫度，以免燒毀電熱元件。禁止向爐內(nèi)灌注各種液體及易溶解的金屬，馬弗爐在低于溫度50℃以下工作，此時爐絲有較長的壽命。2、高溫馬弗爐和控制器必須在相對濕度不超過85%、沒有導(dǎo)電塵埃、性氣體或腐蝕性氣體的場所工作。凡附有油脂之類的金屬材料需進(jìn)行加熱時，有大量揮發(fā)性氣體將影響和腐蝕電熱元件表面，使之銷毀和縮短壽命。因此，加熱時應(yīng)及時預(yù)防和做...

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高溫馬弗爐電極損耗的主要原因

高溫馬弗爐電極損耗的主要原因是：高溫馬弗爐在冶煉過程被氧化造成的化學(xué)損耗以及電極斷折造成的物理損耗。電極斷折的原因分為機械故障和電相主控兩方面。機械故障控制方面為：1.布料合理。各種鋼鐵料在料籃中布料合理，避免輕薄型鋼鐵料在爐子頂部結(jié)成一團難以下行，進(jìn)而形成大塊廢鋼塌料砸斷電極2.熔清時，實驗高溫馬弗爐注意觀察未熔爐料分布情況，對生成的架橋結(jié)構(gòu)，通過吹氧或物理擺動的方法，讓爐料在電極升高位置塌落下來，避免砸斷電極3.電極的安裝要合理及標(biāo)準(zhǔn)化，確保夾持安裝穩(wěn)定4.電極接駁處位置...

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高溫馬弗爐在溫度高的時候應(yīng)該如何冷卻降溫

高溫馬弗爐在溫度高的時候應(yīng)該如何冷卻降溫?fù)?jù)了解，高溫馬弗爐的自動控制爐溫，經(jīng)過自動控制來調(diào)理電爐的溫度，是目前運用比擬成熟的技術(shù)，許多設(shè)備都采用自動溫度控制系統(tǒng)，給熱處置加工工作帶來很大的便當(dāng)。高溫馬弗爐溫度的誤差給定的溫度，電阻爐的熱源的能量是由自動翻開或關(guān)閉，或不時變化的熱源能量的大小，爐溫穩(wěn)定在一個給定的溫度范圍，以滿足熱處置工作。它有兩個給定值，當(dāng)高溫馬弗爐的溫度低于給定的下限值時，接觸器是全開的。當(dāng)爐溫在上下限設(shè)定值之間時，執(zhí)行機構(gòu)局部翻開;當(dāng)爐溫度超越上*，執(zhí)行機...

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二氧化碳培養(yǎng)箱的相對濕度控制方式

培養(yǎng)箱內(nèi)相對濕度的控制是非常重要的，維持足夠的濕度水平才能保證不會由于過度干燥而導(dǎo)致培養(yǎng)失敗。二氧化碳培養(yǎng)箱的相對濕度控制方式培養(yǎng)箱內(nèi)相對濕度的控制是非常重要的，維持足夠的濕度水平才能保證不會由于過度干燥而導(dǎo)致培養(yǎng)失敗。大型的二氧化碳培養(yǎng)箱是用蒸汽發(fā)生器或噴霧器來控制相對濕度水平的，而大多數(shù)中、小型培養(yǎng)箱則是通過濕度控制面板（humiditypans）的蒸發(fā)作用產(chǎn)生濕氣的（其產(chǎn)生的相對濕度水平可達(dá)95-98％）。一些培養(yǎng)箱有一個能在加熱的控制面板上保持水份的濕度蓄水池（hum...

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